2021年结直肠癌分子检测高通量测序华北地区专家共识发布，要点一览！

在手肝癌在要务的发染病率红褐色据统计上升的趋势，世 界卫生其组织亚太地区癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)原始数据显示，要务 2020 年在手直 肠癌的从新发染病症数为 56 万例，因在手肝癌死亡染病症达 29 万例 。 约 25%的在手肝癌病变在诊断时已再次出现远 处移出，此皆，25%的病变在病患处理事件过程里面牵涉到移出，晚期 病变预后较差，5 年生存率缺乏 15%。 分子标志物侦办 校准是侦办验靶向病患获为重人群的前里斯，近些年随着扫描 核心技术的迅猛发展，生物核心技术脱氧核糖核酸，也被称作过新一代脱氧核糖核酸( next generation sequencing，NGS)，因其在通量、成本及效率 等之外的总合占优势，在骨髓表征扫描里面展现出越少 来越少广阔的应该用充满信心。 然而 NGS 扫描核心技术处理事件过程复杂， 对研究小组环境条件、其他部门能力及数量级管理促请高，任何 一个该集再次出现关键问题，均会不良影响扫描在手果的准确官能，进而不良影响诊断协调。

为保查核诊断保健岗位的准确官能和前里斯官能，本认同由诊断医师在手合在手肝癌实际保健均生产力发起，业内诸多扫描一些公司参与，染病理及侦办验科学家指导岗位，从在手肝癌 NGS 扫描的诊断出发点及研究小组处理事件过程质控出发点共同起草里面国科学家认同，以指导岗位 NGS 扫描核心技术在在手肝癌保健里面的前里斯应该用。

1，生物标志物在在手肝癌里面的诊断意味

目前较实际的肠癌实际官能疾染病疾染病主要有 3 类:Lynch 症候群、后代官能腺肿官能鳞状染病 ( familial adenomatous polyposis，FAP）和黑斑鳞状染病（P⁃J 症候群）。 同时《里面国诊断骨髓物理学会 ( CSCO) 在手肝癌保健须知 2020 版本》 针对官能疾染病在手肝癌筛查和线粒体诊断规章了前里斯。

FAP 举荐同步进行 APC 皆显子脱氧核糖核酸/片断缺少脱氧核糖核酸，有线粒体里斯示 FAP 或衰减型式 FAP(AFAP);无线粒体 则举荐行 MUTYH 皆显子脱氧核糖核酸 / 片断缺少脱氧核糖核酸，有突 变里斯示 MUTYH 实际鳞状染病(MUTYH⁃associated pol⁃ yposis，MAP)。 对于无任何可知的鳞状染病症候群线粒体 的致染病官能表征，首选多表征扫描，多线粒体 Panel 应该最主要所有鳞状和在手肝癌实际线粒体。

在手肝癌里面常见 TMB 核对分析方法及扫描范围概要

TMB 扫描有助于帮助侦办验免疫病患潜在获 为重的病变，特别是在里斯高晚期恶官能骨髓病变的普遍性抒 解率和总生存期。 MSI⁃H/dMMR 往往也有如 TMB⁃H，MSI⁃H 骨髓所发本里面有约 83%表现为 TMB⁃H，且有 97%的所发本 TMB≥10 Muts/ Mb。 在诊断研究和系统化处理事件过程里面，TMB 的风险评估核对标准化 在各不相同癌种里面存在差异，而各不相同靶向脱氧核糖核酸 Panel 的 TMB 扫描体系之间 TMB 频率没法通用。

病变规章实际病患方案的处理事件过程，在手合在手肝癌生物标志物实际诊断意味，建谘扫描作过如下举荐 ：

2，所发本处理事件及仓储

FFPE 所发本为保查核核糖数量级，手术或侦办查和

其组织应该在离体 30 min 内浸入到 100 ml 的 4%的大 羟基硫酸里面同步进行一般来说，消除采用氯化钠及含有重金属 离子的一般来说盐酸。 其里面，大标本一般来说星期为 6 ~ 48 h，不大约 72 h;小侦办查和体可一般来说 6 ~ 12 h。 对 其里面 1 张 FFPE 所发本同步进行切片染，并在成像 下观察骨髓细胞核的纯度和数量。 若骨髓纯度不 缘，则研究小组均需要对通过富集后符合数量级促请的 标本同步进行风险评估，或者混合物成 FFPE 细胞核学蜡块后 同步进行核糖里斯取。 值得注意的是，卓有成效 NGS 扫描前 应该通过 HE 染风险评估骨髓细胞核纯度，至少满缘肿 肿细胞核纯度在 20%以上。

手术或侦办查和的从可口其组织所发本

从可口其组织可里斯取到高数量级的核糖。 从可口其组织应该在离体 30 min 内 将其留有于盐酸氮罐或者-80 °C 微波炉里面，防止 RNA 等 核糖甲醛。 如均需风险评估骨髓细胞核纯度，可先以用浓缩切 片染体分析方法，若骨髓细胞核纯度缺乏，可通过记号 骨髓范围内同步进行富集。 从可口其组织可在盐酸氮、-80 °C 冰 箱或清洁剂里面长期留有。

人体内所发本

对于存在于人体内里面的循环 DNA， 即 ctDNA，取所发时可采用专用的 ctDNA 留有管先以血， 先以血后轻柔颠倒 8 ~ 10 次，确保先以血管里面的 ctDNA 留有盐酸与血浆充分混匀，常温仓储留有方能，严禁 冻融血浆;到达研究小组后，分离人体内，里斯取基质 DNA[26] 。 也可采用一次官能 EDTA 抗凝真空先以血管， 挖掘 8 ~ 10 ml 全血，油脂运在先，2 h 内分离人体内，里斯 取基质 DNA，如均需留有，请置于-80 °C 微波炉里面，并避 免连续不断冻融。

所发本装载前里斯

送标准化据闻作过前里斯( SOPs) 以确保装载处理事件过程里面各类所发 本的安全官能和处理事件过程的可控官能(详见第 4 节)。 含硫 材料可以常温运在先，血浆所发本均需要在冰冻条件下运 在先，核糖所发本均需在 4 °C或浓缩条件下运在先。

3，年度报告解读及标准化C#

NGS 诊断年度报告相关联主旨

线粒体扫描的诊断报 告应该当最主要:(1)基础接收者:研究小组英文名称、物理据闻 作过其他部门、年度报告备案其他部门、获知。 (2)受侦办者的 基本接收者:应该最主要受侦办者姓名、官能别、出生日期、 接受扫描的日期、扫描的目的和受侦办者的诊断指 征等。 (3)所发本的接收者:所发本类型式，如 DNA、皆周血、唾盐酸、从可口其组织、FFPE 其组织等;挖掘星期和先以 集手部、所发本N、向警方星期、扫描年度报告星期和所发 本主要质控情况，如 DNA 数量级风险评估以及脱氧核糖核酸质 量风险评估等。 (4)扫描单项:线粒体 Panel 的扫描位 点及 侦办 校准 范 围、 侦办 校准 祯 器、 侦办 校准 试 剂， 是 否 为 NMPA 批准采用的扫描氢化以及 NMPA 获批的 线粒体残基接收者，或研究小组自建扫描( laboratory de⁃ veloped tests，LDTs) 氢化、扫描分析方法、扫描范围、侦办 校准下限(LoD)等。 (5)扫描在手果及表征解读:对 线粒体表征的扫描在手果同步进行解读，如侦办出的线粒体 型式、表征在手果、染体变化情况、扫描在手果的致染病 官能PG、药物接收者及诊断意味、表征解读引用的 参考资料古书等。 (6)标注扫描分析方法的研究小组核心验 查核在手果，扫描局限官能及连续官能，进一步扫描的 建谘。

线粒体表征的命名

对线粒体表征的描述应该遵循 一定的前里斯和前里斯，举荐采用人类线粒体组表征基金会 命名须知(www.hgvs.org)，激活本的必需建谘先以用线粒体座参考资料线粒体组数列资料库( Locus Reference Ge⁃ nomic， https:/ /www.lrg⁃sequence.org) 界定的激活本或者多个亚太地区资料库公认的主要激活本。 对官能疾染病在手肝癌实际线粒体表征的陈述，建谘以旧金山医学免疫学学院( American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG;https:/ / www.acmg.net)须知为标准化，在扫描在手果里面列据悉体的表征残基接收者，最主要线粒体英文名称、所参考资料的人类线粒体组版本本号、激活本参考资料数列版本本号、核苷酸表征、碱基表征、皆显子 / 内含子序号、线粒体杂合官能、染体N及极坐标等等。

诊断意味的解读和注释

对于骨髓体细胞核线粒体，先以用PG处理事件的方式 总合有如诊断、诊断须知、资料库或古书查核据，可 以将骨髓体细胞核表征分为诊断意味实际(I 级)、有潜在诊断意味(II级)、诊断意味不实际(III 级) 和良官能或显然良官能线粒体( IV级) 。 研究小组均需要建立归入及PG和年度报告的 SOPs，SOPs 应该至少最主要两 个之外:(1) 对体细胞核表征同步进行PG的处理事件过程; (2)在日常扫描里面年度报告哪一级或哪几级线粒体残基。 PG的处理事件过程确有记录，最主要查核据来源的须知、古书、 资料库、查核据类别、PG在手果等。 诊断查核据不得不突 变残基PG，可根据《生物核心技术脱氧核糖核酸核心技术诊断前里斯化 应该用上海科学家认同》发表的体细胞核线粒体残基和临 床查核据分为不限 4 级。

对胚系线粒体的扫描

除了里面皆保健须知及 最重要参考资料古书皆，则有 Online Mendelian Inheritance in Man (http:/ /omim.org)和旧金山 ACMG 可参考资料。 ACMG 须知将表征残基致染病官能的类别分为致染病、疑 似致染病、诊断意味未明、供称良官能和良官能 5 个类别。 年度报告里面应该所列与官能疾染病在手肝癌(如 FAP、Lynch 综 合征等)实际的致染病以及供称致染病表征，并对表征 的致染病官能同步进行分析解读[28] 。

意味推断残基的处理事件

无论是骨髓体细胞核 线粒体，或是胚系线粒体，都存在意味推断残基。 物理 会议室均需规章实际财政政策用来确定是否年度报告或者不年度报告 诊断意味推断的残基，并读出陈述和参考资料资料库， 并且要在年度报告里面注明本研究小组据悉诊断年度报告的 规则。

DPYD 扫描在手果

里面等代谢型式病变，应该基于 活官能分值减小起始mg;慢代谢型式应该消除采用汞尿甘氨酸 啶及其前体药物。 UGT1A1 扫描在手果里面，UGT1A1∗28 和∗6 为纯合表征型式或双杂合表征型式的病变应该减小 伊立替康的mg，举荐mg为 150 mg / m2 。

低丰度线粒体在手果的处理事件

对所发本同步进行 NGS 侦办 校准时如再次出现较低丰度的线粒体在手果( 往往其组织学所发本最低 5%，血浆所发本最低 1%或最低扫描 LoD)时，建 谘总合风险评估 NGS 物理SDK安全官能、脱氧核糖核酸深度以及骨髓 细胞核分之一等因素总合考虑。 比如说对于靶向病患相 关的线粒体建谘采用其他扫描分析方法同步进行进一步验查核 获知(如 Sanger，dPCR 等)。

知情达成协议

建谘里斯供病变打字或者在线版本的知情书。

年度报告C#

研究小组应该根据扫描单项，给出近似于该 的扫描年度报告C#(表 7)，并形成 SOP 文件。 C#里面 应该实际所列扫描年度报告里面应该里斯供的接收者，如病变基本 接收者、所发本接收者、扫描接收者、扫描在手果、在手果表述、实 验会议室接收者、扫描分析方法的局限官能以及其他主旨等。

原始出处

里面国抗癌基金会骨髓靶向病患大学本科委员会.在手肝癌分子扫描生物核心技术脱氧核糖核酸里面国科学家认同 .诊断骨髓学杂志 2021 年 3 月第 26 卷第 3 期 Chinese Clinical Oncology，Mar. 2021，Vol.26，No.3